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大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書
發(fā)布時(shí)間:2025/7/10瀏覽:66次
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  大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書

  BS-2889大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒

  一、試劑盒組成與保存條件

  大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒通常包含以下主要組分:

  預(yù)包被微孔板(8×12 strips或8×6)

  TGF-β2標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉,通常濃度為10,000pg/mL)

  生物素標(biāo)記的檢測抗體(120μL/70μL)

  HRP標(biāo)記鏈霉親和素(120μL/70μL)

  TMB顯色液(10mL/6mL)

  終止液(2M H?SO?,10mL/6mL)

  洗滌緩沖液(20×濃縮液)

  樣本稀釋液

  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  保存條件:未拆封試劑盒應(yīng)4℃保存;拆封后,標(biāo)準(zhǔn)品需-20℃保存,其他組分4℃保存?

  二、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

  1. 樣本處理

  血清?:室溫血液自然凝固10-20分鐘,2000-3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘,仔細(xì)收集上清,如出現(xiàn)沉淀應(yīng)再次離心?

  血漿?:選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后離心(2000-3000轉(zhuǎn)/分,20分鐘),收集上清?

  細(xì)胞培養(yǎng)上清?:離心去除顆粒后分裝保存于-80℃,避免反復(fù)凍融?

  組織勻漿?:按重量體積比1:9加入PBS勻漿,離心后取上清?

  2. 試劑平衡

  所有試劑及樣本需室溫(18-25℃)平衡30分鐘,避免37℃直接溶解?

  3. 標(biāo)準(zhǔn)品配制

  復(fù)溶標(biāo)準(zhǔn)品后,用稀釋液梯度稀釋至5,000pg/mL→78pg/mL(7個(gè)濃度點(diǎn)),0pg/mL為空白對(duì)照?

  三、實(shí)驗(yàn)步驟(雙抗體夾心法)

  加樣?:每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,37℃孵育90分鐘?

  洗滌?:棄液后用PBST洗滌液洗板5次,每次拍干?

  加檢測抗體?:每孔加100μL生物素化抗體(1:100稀釋),37℃孵育60分鐘?

  加酶結(jié)合物?:加入HRP標(biāo)記鏈霉親和素(1:100稀釋),37℃避光孵育30分鐘?

  顯色?:加TMB顯色液100μL/孔,避光反應(yīng)15-20分鐘(顯藍(lán)色)?

  終止與讀數(shù)?:加50μL終止液(變黃色),10分鐘內(nèi)在450nm波長測OD值(參考波長570-630nm)?

  四、數(shù)據(jù)分析

  標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制?:以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),擬合四參數(shù)邏輯曲線(R2>0.99)?

  樣本濃度計(jì)算?:根據(jù)樣本OD值從曲線反推濃度,超出范圍需稀釋后重測?

  質(zhì)量控制?:批內(nèi)CV應(yīng)<10%,批間CV<12%?

  五、注意事項(xiàng)

  安全防護(hù)?:

  避免直接接觸終止液和底物A、B,一旦接觸盡快用水沖洗?

  實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品?

  禁止用嘴吸取試劑盒任何成分?

  操作要點(diǎn)?:

  試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫?

  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋密封保存?

  避免細(xì)菌污染、反復(fù)凍融或劇烈震蕩?

  一次加樣時(shí)間控制在10分鐘內(nèi),樣本多時(shí)推薦使用多道移液器?

  干擾因素?:

  不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制HRP活性?

  避免溶血或脂血樣本影響檢測結(jié)果?

  結(jié)果判讀?:

  反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng)?

  陰性反應(yīng)為無色或極淺,可用"+"、"-"號(hào)表示?

  也可測OD值:若大于陰性對(duì)照OD值的2.1倍即為陽性?

  六、技術(shù)參數(shù)

  靈敏度?:通常

  注:以上資料僅供參考,具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

  天津本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。

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